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L'applicazione di sostanze naturali con effetto battericida è l'obiettivo della ricerca, che mira a una produzione più sostenibile, implicando diverse fonti di sostanze per nuove formulazioni terapeutiche. Questo studio presenta la caratterizzazione chimica, la tossicità e l'attività antimicrobica dell'olio essenziale (OE) delle foglie di Bixa orellana Labill. L'OE è stato estratto tramite idrodistillazione a 100 °C per 3 ore. Sono stati determinati i parametri fisico-chimici e la caratterizzazione chimica è stata effettuata mediante gascromatografia accoppiata a spettrometria di massa (GC/MS). L'indagine sulla tossicità è stata condotta tramite il bioassay con Artemia salina Leach. I metodi di diffusione su disco e di diluizione in brodo sono stati utilizzati per valutare l'attività antimicrobica contro i batteri Escherichia coli e Staphylococcus aureus. La LC50 nel saggio di tossicità è stata determinata a 355 mg L-1 e classificata come non tossica. L'OE ha mostrato attività antimicrobica contro i microrganismi testati e conteneva un totale di 320 mg EAT g-1 di fenoli totali. I risultati ottenuti sottolineano l'importanza di evidenziare questo prodotto come alternativa terapeutica e di promuovere il suo potenziale di applicazione.